在實驗室內(nèi),還會有以下常用的基本設備。
Ⅰ. 儀器:
(1)顯微鏡:倒置顯微鏡——是組織細胞培養(yǎng)室所必需的日常工作常規(guī)使用設備之一,便于掌握細胞的生長情況并觀察有無污染等。
(2)培養(yǎng)箱:體外培養(yǎng)的細胞和體內(nèi)細胞一樣,需要在恒定的溫度下生存,大多數(shù)情況下,最適溫度是37℃,溫差變化一般不應超過±0.5℃,細胞在溫度升高2℃時,持續(xù)數(shù)小時即不能耐受,40℃以上將很快死亡。因此需要有能控制溫度的培養(yǎng)箱,如具有較高靈敏度的恒溫培養(yǎng)箱及CO2培養(yǎng)箱。
(3)干燥箱:用于細胞培養(yǎng)箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用,玻璃器皿等須干熱消毒。干熱消毒時,電熱干燥箱升溫較高,一般需達到160℃以上。通常使用鼓風式電熱干燥箱。其優(yōu)點是溫度均勻、效果較好,缺點是升溫過程較慢。升溫時不能先升溫后鼓風而應鼓風與升溫同時開始,至100℃時,停止鼓風,應避免包裹器皿的紙或棉花燒焦,燒焦的碎屑可影響細胞的生長。消毒后,不能立即打開箱門以免驟冷而導致玻璃器皿損壞,應等候溫度自然下降至100℃以下方可開門。
(4)水純化裝置:細胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高,細胞培養(yǎng)以及與細胞培養(yǎng)工作相關的液體的配制用水必須事先嚴格純化處理。水純化時可采用離子交換裝置或蒸餾器。離子交換純水尚不能有效去除有機物,因此用水時尚需再次蒸餾。進行細胞培養(yǎng)時配制各種培養(yǎng)液及試劑等均需使用三次蒸餾水:即使是用于玻璃器皿的沖洗,也應使用二次以上蒸餾水。
(5)冰箱:細胞培養(yǎng)室必須配備。
a.普通冰箱或冷藏柜
——儲存培養(yǎng)液、生理鹽水、Hank’s液試劑等培養(yǎng)用的物品及短期保存組織標本。
b.低溫冰箱(-20℃)、超低溫冰箱
——用于儲存需要冷凍保存生物活性及較長時期存放的制劑,如酶、血清等。
——細胞培養(yǎng)室的冰箱應屬專用,不得存放易揮發(fā)、易燃燒等對細胞有害的物質(zhì),且應保持清潔。
(6)細胞冷凍儲存器:儲存器常用的是液氮容器。根據(jù)使用需要分為不同的類型及多種規(guī)格。選擇購置液氮容器時要綜合考慮容積大小,取放使用方便及液氮揮發(fā)量(經(jīng)濟)三種因素。液氮容器的大小可自25L~500L,可以儲存1ml的安瓿250~15000個左右。液氮溫度可低達-196℃,使用時應防止凍傷。由于液氮不斷揮發(fā),應注意觀察存留液氮情況,及時定期補充液氮,避免揮發(fā)過多而致細胞受損。
(7)離心機:進行細胞培養(yǎng)時,常規(guī)需要進行制備細胞懸液、調(diào)整細胞密度、洗滌、收集細胞等工作,通常需要使用離心機。
a.一般可常規(guī)配置4000rpm的國產(chǎn)臺式離心機,例如細胞沉降,使用80~100g的離心機即可,離心力過大有時可能引起細胞的損傷。
b.另外,可根據(jù)需要添置其他類型如大容量或可調(diào)節(jié)溫度的離心機等。
c.若需特殊用途,例如某些細胞的分離制備需梯度離心,則需另行配置實驗所需的具備其他特殊功能的離心機。
(8)天平:常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。
分析天平的感量為0.1mg、0.01mg和0.001mg。根據(jù)稱取物質(zhì)的量和稱量精度的要求,選擇適宜級別的天平。要求精密稱定時,當取樣量大于100mg選用感量為0.1mg天平,在100-10mg選用感量為0.01mg天平,小于10mg選用感量為0.001mg天平。
(9)消毒器:直接或間接與細胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。
(10)濾器:目前細胞培養(yǎng)工作中采用的培養(yǎng)用液,包括人工合成培養(yǎng)液、血清、消化用胰酶等常含有維生素、蛋白、多肽、生長因子等物質(zhì),這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能,因而上述液體多采用濾過消毒以除去細菌。
Ⅱ. 培養(yǎng)用器皿:
(1)培養(yǎng)器皿:供細胞接種、生長等用的器皿,可由透明度好、無毒的中性硬質(zhì)玻璃或無毒而透明光滑的特制塑料制成。
(a)玻璃培養(yǎng)器皿的優(yōu)點是多數(shù)細胞均可生長,易于清洗、消毒,可反復使用,并且透明而便于觀察;缺點是易碎,清洗時費人力。
(b)塑料制培養(yǎng)器皿的優(yōu)點是一次性使用,廠家已消毒滅菌密封包裝,打開即可用于細胞培養(yǎng)操作。
常用的培養(yǎng)器皿:
培養(yǎng)瓶:由玻璃或塑料制成。主要用于培養(yǎng)、繁殖細胞。進行培養(yǎng)時培養(yǎng)瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞,膠塞多用于密封培養(yǎng)。國產(chǎn)培養(yǎng)瓶的規(guī)格以容量(ml)表示,如250ml、100ml、25ml等;進口培養(yǎng)瓶則多以底面積(cm2)表示。
培養(yǎng)皿:由玻璃或塑料制成,供盛取、分離、處理組織或做細胞毒性、集落形成、單細胞分離、同位素摻入、細胞繁殖等實驗使用。常用的培養(yǎng)皿規(guī)格有10cm、9cm、6cm、3.5cm等。
多孔培養(yǎng)板:為塑料制品??晒┘毎寺〖凹毎拘缘雀鞣N檢測實驗使用。其優(yōu)點是節(jié)約樣本及試劑,可同時測試大量樣本,易于進行無菌操作。培養(yǎng)板分為各種規(guī)格,常用的規(guī)格有:96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。
各種單層生長的細胞在培養(yǎng)器皿中長滿時可獲得的細胞數(shù),主要是取決于器皿的底表面積和細胞體積的大小。常用培養(yǎng)器皿及可獲得的細胞數(shù)(以Hela細胞為例)。
(2)培養(yǎng)操作有關的器皿:
a.貯液瓶:主要用于存放或配制各種培養(yǎng)用液體如培養(yǎng)液、血清及試劑等。貯液瓶分為各種不同規(guī)格,如1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、5ml等。
b.吸管:主要分為刻度吸管、無刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、轉移液體,常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等規(guī)格。無刻度吸管分為直頭吸管及彎頭吸管,除可以作吸取、轉移液體外,彎頭尖吸管還常用于吹打、混勻及傳代細胞。
c.加樣器(移液器):用于吸取、移動液體或滴加樣本??筛鶕?jù)需要調(diào)節(jié)量的大小,吸量準確、方便。尤以微量加樣器,可保證實驗樣品(或試劑)含量精確,重復性良好。目前,可高溫消毒的,多通道的各類移液器可供使用者選擇,能確保加樣準確、快速、方便并且達到無菌要求。
(3)其他用品:尚有收集細胞用的離心管,放置試劑或臨時插置吸管用的試管,裝放吸管以便消毒的玻璃或不銹鋼容器,用于存放小件培養(yǎng)物品便于高壓消毒的鋁制飯盒或貯槽,套于吸管頂部的橡膠吸頭,封閉各種瓶、管的膠塞、蓋子、凍存細胞用的安瓿或凍存管、不同規(guī)格的注射器、燒杯和量筒以及漏斗,超凈工作臺使用的酒精燈,供實驗人員操作前清潔消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型噴壺等。
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