1、管理制度與SOP制定

1.1管理制度

SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室管理制度主要包括：《濱州醫(yī)學(xué)院SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物管理辦法》《SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室使用管理規(guī)定》《SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室工作人員管理守則》《實(shí)驗(yàn)室生物安全管理規(guī)定》等，從實(shí)驗(yàn)室管理、行為規(guī)范、環(huán)境質(zhì)量控制等方面保障屏障環(huán)境達(dá)標(biāo)。同時(shí)實(shí)驗(yàn)室制定《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物安全應(yīng)急預(yù)案》《實(shí)驗(yàn)室消防安全應(yīng)急預(yù)案》《實(shí)驗(yàn)室水電安全應(yīng)急預(yù)案》等多項(xiàng)應(yīng)急預(yù)案，以保障科研人員的人身安全。

1.2標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程SOP

兩年來(lái)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室制定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)及繁育標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）4本，包括《動(dòng)物實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》《SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室管理制度》《動(dòng)物飼養(yǎng)及設(shè)備設(shè)施標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)管理標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》，其中細(xì)化規(guī)程56項(xiàng)，包括：實(shí)驗(yàn)操作、分組編號(hào)、抓取、處死、采樣等實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程；SOP管理、采購(gòu)、登機(jī)、消毒、人員物品動(dòng)物進(jìn)出、清潔、記錄等管理標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程；大小鼠飼養(yǎng)、檢疫、環(huán)境設(shè)施檢測(cè)、滅菌器操作、IVC使用維護(hù)等飼養(yǎng)及設(shè)施標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程；KM、C57BL/6J小鼠、SD大鼠生產(chǎn)飼養(yǎng)、采樣送檢等生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。

2、屏障系統(tǒng)運(yùn)行

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物居住的環(huán)境，它是用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)、實(shí)驗(yàn)的建筑和設(shè)備的總和，也是最基礎(chǔ)的硬件環(huán)境。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施環(huán)境按空氣凈化控制程度可以分為普通環(huán)境、屏障環(huán)境和隔離環(huán)境三大類，其中屏障環(huán)境是指符合動(dòng)物居住的要求，嚴(yán)格控制人員、物品和空氣的進(jìn)出，適用于飼育無(wú)特定病原體（SPF）級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。濱州醫(yī)學(xué)院SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室流程圖如圖1所示，采用三走廊設(shè)計(jì)，實(shí)現(xiàn)了人流、物流、污物流分離，避免對(duì)屏障內(nèi)環(huán)境造成交叉污染。

屏障環(huán)境能夠保持符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)要求的飼養(yǎng)條件離不開(kāi)各種設(shè)備系統(tǒng)的正常運(yùn)行。對(duì)空調(diào)系統(tǒng)、IVC系統(tǒng)、高壓滅菌系統(tǒng)、照明系統(tǒng)、飲水系統(tǒng)的維護(hù)和檢查是保證動(dòng)物房?jī)?nèi)各項(xiàng)指標(biāo)正常穩(wěn)定最重要的部分。屏障環(huán)境的穩(wěn)定必須定期對(duì)動(dòng)物房?jī)?nèi)壓差、換氣、塵埃粒子、溫度、濕度、照度進(jìn)行監(jiān)測(cè)；對(duì)IVC送風(fēng)、排風(fēng)，進(jìn)行定期檢查；定期清潔IVC送排風(fēng)管的粉塵，更換空調(diào)初、中、高效過(guò)濾器，IVC初效、高效過(guò)濾器等。

2.1溫度、濕度、壓差

濱州醫(yī)學(xué)院SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室屏障內(nèi)溫度區(qū)間為19～24℃，濕度為40%～70%。溫濕度由空調(diào)系統(tǒng)自動(dòng)控制，動(dòng)物飼養(yǎng)人員及控制室值班人員每天（包括周末及節(jié)假日）記錄。

2.2送排風(fēng)

屏障環(huán)境的空氣經(jīng)低效、中效、高效過(guò)濾器進(jìn)入屏障系統(tǒng)，排風(fēng)通過(guò)初效過(guò)濾和中效過(guò)濾及活性炭后排出設(shè)施。屏障內(nèi)空氣潔凈度達(dá)到10000級(jí)，風(fēng)速用風(fēng)速儀測(cè)定，風(fēng)量用風(fēng)量罩測(cè)定并記錄，設(shè)施內(nèi)的氨濃度不得高于14mg/m3，檢測(cè)塵埃粒子數(shù)在350/L以內(nèi)。利用空調(diào)送排風(fēng)系統(tǒng)形成清潔走廊、飼養(yǎng)間、污染走廊、緩沖間、屏障外的靜壓差梯度，壓差控制在10～20Pa，同時(shí)人員、動(dòng)物、物品、污物的走向采用單向流通路線，有效防止空氣逆向形成污染。為保證屏障內(nèi)空氣質(zhì)量，空調(diào)初效過(guò)濾器每月更換2次，中效過(guò)濾器每月更換1次，高效過(guò)濾器每年更換1次，高效過(guò)濾器更換完成后重新調(diào)整屏障環(huán)境壓差。

2.3噪音與振動(dòng)

噪音干擾對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生理活動(dòng)、身體健康具有重要影響。研究表明，噪音干擾通過(guò)影響與物質(zhì)和能量代謝相關(guān)的酶的生理活性從而影響新陳代謝速率，長(zhǎng)期噪音影響會(huì)造成小鼠活動(dòng)減少、進(jìn)食量減少、體重下降。同時(shí)，噪音影響小鼠的神經(jīng)系統(tǒng)，造成記憶力下降、學(xué)習(xí)能力下降、暴躁易怒。因此，控制飼養(yǎng)間內(nèi)噪音在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)以內(nèi)是保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物身心健康的重要環(huán)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)室墻壁采用隔音材料建設(shè)，能有效隔絕外界環(huán)境噪音，日常噪音控制在60分貝以內(nèi)。同時(shí)，規(guī)定飼養(yǎng)間內(nèi)不得使用手機(jī)等通信娛樂(lè)設(shè)備，要求飼養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)操作輕拿輕放，不得大聲喧嘩，減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物噪音干擾。

2.4消毒與滅菌

屏障內(nèi)每個(gè)房間清潔物品實(shí)行專室專用，不得混用，污物必須及時(shí)帶出屏障，不得在屏障內(nèi)存放。每次打開(kāi)IVC籠盒進(jìn)行操作后，地面和操作臺(tái)用消毒液擦拭消毒。屏障內(nèi)每天進(jìn)行日常清掃和地面消毒，每周進(jìn)行屏障內(nèi)整體消毒，使用5%苯扎溴銨、3%過(guò)氧化氫和84消毒液交替噴霧室內(nèi)空間、擦拭地面墻面。無(wú)動(dòng)物區(qū)域，如操作間、走廊、緩沖間等每天開(kāi)啟紫外燈消毒30min。進(jìn)入屏障內(nèi)物品需經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的消毒滅菌處理，否則不得進(jìn)入屏障環(huán)境。經(jīng)高壓滅菌的物品如動(dòng)物籠具、墊料等存放在潔存室內(nèi)，如超過(guò)1周未使用則需重新滅菌。人員進(jìn)入屏障內(nèi)必須穿戴無(wú)菌隔離服、一次性帽子、口罩、手套，并進(jìn)行手消毒。使用過(guò)的隔離服經(jīng)清洗高壓滅菌后可重復(fù)使用，每進(jìn)出一次需更換一件隔離服。人、動(dòng)物、物品都必需遵循從潔凈區(qū)到相對(duì)污染區(qū)的單向流動(dòng)，嚴(yán)格按各流程進(jìn)出屏障環(huán)境。動(dòng)物飲用水由專門動(dòng)物純水設(shè)備制備，經(jīng)初級(jí)濾芯、納米膜、活性炭過(guò)濾罐等過(guò)濾后，通過(guò)磁能紫外滅菌燈照射并產(chǎn)生臭氧，在一系列消毒滅菌后通過(guò)封閉水管直接進(jìn)入屏障內(nèi)，在潔存室取水后供動(dòng)物飲用。

3、日常管理

3.1人員培訓(xùn)

人員操作不規(guī)范是造成屏障內(nèi)環(huán)境污染的最主要因素，為避免此類情況的發(fā)生，保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量，加強(qiáng)對(duì)從業(yè)人員和實(shí)驗(yàn)人員的培訓(xùn)管理是必不可少的。由于本校SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室為開(kāi)放性實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，因此實(shí)驗(yàn)室面向全體師生定期舉辦SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)人員培訓(xùn)。并進(jìn)行考試和現(xiàn)場(chǎng)培訓(xùn)，全部通過(guò)后辦了門禁卡，進(jìn)行動(dòng)物寄養(yǎng)。

3.2物品管理

1）飼養(yǎng)籠具。屏障內(nèi)飼養(yǎng)籠具為IVC籠具，包括籠底、金屬格柵、籠蓋、生命窗等部分。SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室IVC籠具生產(chǎn)廠家為：山東省新華醫(yī)療器械股份有限公司。臟籠具在洗消間內(nèi)進(jìn)行清洗，洗凈后消毒液浸泡30min，用清水沖洗干凈，晾干。經(jīng)初步清洗消毒后的籠具通過(guò)高壓滅菌的方式（121℃，30min）進(jìn)入屏障內(nèi)，存放于潔存室中，使用時(shí)轉(zhuǎn)移至相應(yīng)飼養(yǎng)間，存放的籠具若超過(guò)1周未使用，需重新進(jìn)行高壓滅菌。

2）飼料墊料。SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室使用經(jīng)鈷-60輻照處理后真空（或充氮）包裝的商業(yè)化飼料，墊料使用8目無(wú)塵玉米芯墊料，生產(chǎn)廠家為：南京協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限公司。飼料種類主要包括維持飼料、生長(zhǎng)繁殖飼料、免疫缺陷飼料等。飼料的質(zhì)量必須符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB14925—2010）要求，生產(chǎn)廠家必須提供質(zhì)量合格證、生產(chǎn)日期、當(dāng)日批次的輻照證明及權(quán)威機(jī)構(gòu)檢測(cè)報(bào)告，同時(shí)每批飼料由獸醫(yī)抽樣送檢，經(jīng)檢測(cè)合格后的飼料方可使用。在倉(cāng)庫(kù)存放要離地離墻，倉(cāng)庫(kù)環(huán)境須保持干燥，注意防蟲(chóng)、防鼠、防霉變、防化學(xué)污染，避免暴露在陽(yáng)光下。

3.3動(dòng)物管理

1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)出管理

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)出是影響屏障內(nèi)環(huán)境的重要因素之一，本校SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室要求實(shí)驗(yàn)動(dòng)物必須從具有生產(chǎn)SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可資質(zhì)的單位訂購(gòu)，同時(shí)必須提供合格證明。運(yùn)輸籠具必須滿足通風(fēng)、搬運(yùn)等使用要求，符合SPF級(jí)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)。動(dòng)物進(jìn)入屏障系統(tǒng)前先檢查外包裝是否破損、合格證是否齊全等。檢查無(wú)誤后，用75%酒精對(duì)動(dòng)物運(yùn)輸籠盒進(jìn)行噴灑并擦拭消毒，再由傳遞窗進(jìn)行紫外照射（15min）后，進(jìn)入檢疫觀察室進(jìn)行驗(yàn)收。動(dòng)物在檢疫觀察室內(nèi)進(jìn)行飼養(yǎng)檢疫，檢疫期為1～2周，未見(jiàn)異常情況則轉(zhuǎn)入飼養(yǎng)間進(jìn)行飼養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)。

2）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物日常飼養(yǎng)

飼養(yǎng)員分區(qū)域定量飼養(yǎng)，分工明確。正常實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的墊料、飲水、飼料更換周期為7d，特殊實(shí)驗(yàn)動(dòng)物如糖尿病小鼠等墊料更換周期為2d，每次完成換籠后清潔臺(tái)面、地面。每月更換整體籠具一次，包括籠底、籠蓋、金屬格柵。更換下的臟籠具必須及時(shí)移出屏障，當(dāng)天在洗消間進(jìn)行清理消毒。飼養(yǎng)員每日記錄飼養(yǎng)籠數(shù)、實(shí)驗(yàn)鼠狀態(tài)，飼養(yǎng)間溫度、濕度、壓差，公休日、節(jié)假日輪流值班。飼料放在金屬格柵上以避免沾染排泄物或飲水而潮濕發(fā)霉，剛離乳的仔鼠或特殊情況可放置飼料在玉米芯墊料上以方便取食。成年鼠平均每20g體重每天所需飼料量約為3～5g，飼料投放量依照動(dòng)物一周內(nèi)的攝食量給予。

3）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理

研究表明，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生活環(huán)境、情緒狀態(tài)等因素直接影響到實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)鼠作為哺乳動(dòng)物和人類一樣對(duì)疼痛等具有深切的感知，隨著實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的普及以及醫(yī)學(xué)倫理的完善，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的福利倫理問(wèn)題越來(lái)越受到人們的關(guān)注。2018年2月6日國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員發(fā)布了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T35892—2018《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理審查指南》，規(guī)定了國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)、運(yùn)輸和使用過(guò)程中的福利倫理審查和管理要求。相關(guān)文件的發(fā)布為保障國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利提供了理論支持，雖然科研人員正越來(lái)越重視實(shí)驗(yàn)過(guò)程中“3R”原則的實(shí)施，但在全球范圍內(nèi)“3R”原則的影響力仍需進(jìn)一步提高，動(dòng)物福利倫理仍需要更多的關(guān)注和推廣。

4、結(jié)語(yǔ)

總之，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在高校、科研單位等的教學(xué)科研中發(fā)揮了重要的作用。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的身心健康直接影響到科研數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施的等級(jí)直接影響到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量，關(guān)系到科研數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性、可重復(fù)性。因此建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)化動(dòng)物設(shè)施、提高動(dòng)物福利是保證動(dòng)物實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的基礎(chǔ)。本文以濱州醫(yī)學(xué)院SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室為例，總結(jié)探討了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室日常管理運(yùn)行方面的內(nèi)容，為SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)化管理提供參考。


陜西宏碩實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司致力于為客戶提供專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室整體設(shè)計(jì)規(guī)劃、實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)工程建設(shè)（實(shí)驗(yàn)室裝修裝飾、家具、通風(fēng)、集中供氣、生物實(shí)驗(yàn)室、純水系統(tǒng)、廢氣處理、廢水處理）、實(shí)驗(yàn)室設(shè)備配套、等幾大領(lǐng)域的技術(shù)咨詢、設(shè)計(jì)、安裝以及售后服務(wù)等。